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Tの誘発
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Tの誘発

Aug 03, 2023

寄生虫とベクター 16 巻、記事番号: 269 (2023) この記事を引用

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1 オルトメトリック

メトリクスの詳細

Plasmodium ovale による感染は広く分布していますが、調査されることはほとんどなく、その結果生じる疾患の負担は過小評価されてきました。 Plasmodium ovale curtisi ダフィー結合タンパク質ドメイン領域 II (PocDBP-RII) は、P. ovale curtisi による網赤血球認識と宿主細胞侵入に必須のリガンドです。 しかし、PocDBP-RII のゲノム変異、抗原性、免疫原性については、依然として大きな知識不足が残っています。

2012年から2016年にかけて、アフリカ17カ国から中国に帰国した出稼ぎ労働者から合計93個のP. ovale curtisiサンプルが収集された。遺伝子多型、自然選択、コピー数変動（CNV）が配列決定とリアルタイムPCRによって調査された。 。 組換え PocDBP-RII (rPocDBP-RII) タンパク質の抗原性と免疫原性をさらに調べ、タンパク質マイクロアレイとフローサイトメトリーを使用して免疫マウスの体液性および細胞性反応を評価しました。

効率的に発現および精製された rPocDBP-RII (39 kDa) は、マウスの免疫化のための抗原として使用することに成功しました。 PocDBP-RII遺伝子のハプロタイプ多様性(Hd)は0.105、塩基多様性指数(π)は0.00011であった。 収集された P. ovale curtisi の分離株ではコピー数の増加は見つかりませんでした。 さらに、rPocDBP-RII は、1:16,000 の血清 IgG 抗体力価で持続的な抗原特異的抗体産生を誘導しました。 IL-10 産生細胞ではなく、IFN-γ 産生 T 細胞が、rPocDBP-RII の刺激に応答して活性化されました。 PBS 免疫マウス (陰性対照) と比較して、rPocDBP-RII 免疫マウスでは CD4+CD44highCD62L- T 細胞 (エフェクターメモリー T 細胞) および CD8+CD44highCD62L+ T 細胞 (セントラルメモリー T 細胞) の割合が高かった。

PocDBP-RII 配列は、P. ovale curtisi の臨床分離株において高度に保存されていました。 rPocDBP-RII タンパク質は、特異的抗体を誘導することに加えて、IFN-γ 産生 CD4+ および CD8+ T 細胞およびメモリー T 細胞を介して防御的な血液期免疫を媒介する可能性があります。 我々の結果は、rPocDBP-RIIタンパク質がマラリアの制御と排除活動の評価と指針を提供するワクチン候補としての可能性を持っていることを示唆しました。

マラリアはプラスモディウム属の種によって引き起こされる病気であり、2021 年には世界で推定 2 億 4,700 万人のマラリア症例が発生し、過去 5 年間の症例増加のほとんどは WHO アフリカ地域で発生しています [1]。 人間に感染する5種のマラリア原虫のうち、卵形マラリア原虫はマラリアの良性症状を引き起こすため、しばしば見逃されます。 Plasmodium ovale は、P. ovale curtisi と P. ovale warikeri と呼ばれる 2 つの遺伝的に異なる亜種に分類されることが証明されています [2]。前者は輸入症例の割合が高く、潜伏期間が長く、血小板数と総白血球数がより多くなります。後者によって引き起こされるマラリア[3、4]。 しかし、卵形マラリア原虫の形態学的特徴、臨床症候群、治療に対する反応および再発の特徴は三日熱マラリア原虫のものと類似しているため[5]、日常的な診断において三日熱マラリア原虫と間違われやすく、したがって卵形マラリア原虫の世界的な蔓延を過小評価している。 P. ovale [3、6]。 例えば、記述的研究では、アフリカから輸入されたP. ovaleが、中国河南省の総マラリア症例の大部分を占めており、三日熱マラリア原虫よりもさらに多いことが示されました[7]。 したがって、アフリカにおけるマラリア撲滅プログラムには、これまで無視されてきたマラリア原虫を制御する戦略を含める必要があります。

ダフィー結合タンパク質 (DBP) は、宿主ケモカイン ダフィー抗原受容体 (DARC) との相互作用を介して、三日熱マラリア原虫および P. knowlesi のメロゾイトによる宿主網状赤血球への侵入に関与する、有望な血液期ワクチン候補と考えられています [8]。 9、10]。 PvDBP の機能的な受容体結合ドメインは、ダフィー結合様 (DBL) ドメインとしても知られる N 末端システインリッチ領域 II (DBP-RII) まで追跡されています [11]。 それにもかかわらず、免疫選択圧下では、対立遺伝子の多様性により PvDBP-RII の反応性と機能的免疫原性が失われる可能性があり、これはワクチン開発の潜在的な課題である [12、13]。 Plasmodium におけるもう 1 つの重要なタイプのゲノム変異は、コピー数変異 (CNV) です [14]。 実際、一塩基多型 (SNP) [15] および CNV [16] が PvDBP-RII で同定されており、これらは PvDBP 体液性免疫に対する三日熱マラリア原虫の回避を促進し、ワクチンの有効性を制限する可能性があります。 具体的には、DBPに対する機能的抗体は標的優先エピトープを示します[17]が、DBPIIの対立遺伝子変異体はMBC由来抗体以外の株特異的抗体の反応性を変化させる可能性があります[18]。 さらに、マラリア感染のマウスモデルからのデータは、CD4+ および CD8+ T 細胞が IFN-γ や IL-10 などのサイトカインの産生を制御し [19]、その後、メモリー T 細胞が防御的な血液期免疫を媒介する可能性があることを示唆しています [20, 21] ]。

0.5 or ΔCt value between test sample and negative control was < 3. Text reports containing the Ct values for each well were exported to Excel (Microsoft) and analyzed by 2−∆∆Ct method of relative quantification to estimate copy numbers. If the N-fold copy number was between these values (0.7 < N-fold < 1.3), the test sample was considered to carry one copy of the target gene. The test sample containing two CNs was repeated at N-fold > 1.3 to ensure the reliability of the amplification results./p> 12 h at 4 °C with agitation. Ultrafiltration method was used to achieve the effect of concentration after the last time of dialysis. The purified and concentrated rPocDBP-RII protein was treated with 2 × loading dyes with and without dithiothreitol (DTT, reducing condition) and then analyzed by 12% SDS-PAGE with Coomassie Brilliant Blue R-250 PAGE staining, western blot and Pierce BCA Protein Assay Kit. In addition, the endotoxin test showed that the amount of endotoxin in rPocDBP-RII was < 1 EU/ml./p> 90%, meeting the requirements of recommended amplification efficiency [38]. Furthermore, N-fold copy number (2−∆∆Ct) observed in pREF2 was obviously twice the number in pREF1 at each dilution (Fig. 3B), confirming that the 2−∆∆Ct calculation could be applied./p> 1.3, indicating that all the isolates carried one copy of the PocDBP-RII gene. Nineteen samples that did not meet the criteria (N-fold > 0.7) used in the methodology were excluded from the analysis. The failure of the CN detection in these samples may have been caused by the low-grade parasitemia resulting in too little P. ovale curtisi gDNA extracted for qPCR. This situation was also present in the process of calculating the N-fold copy number of pREF1 and pREF2, where the N-fold copy numbers exhibited great instability when the DNA molecule was < 320 (data not shown). As PocDBP-RII is evolutionarily stable and free of CNV, enabling it to meet the primary requirement for developing a valuable antigen as vaccines, the next step was to ensure its antigenicity and immunogenicity./p> 0.05) or CD8+ T cells (rPocDBP-RII, 1.43 ± 0.32%; PBS, 1.49 ± 0.72%, P > 0.05) (Fig. 6D). These data suggest that immunization with rPocDBP-RII was capable of inducing IFN-γ-producing T cells and that cellular immunity might also be involved in rPocDBP-RII-mediated protection against P. ovale curtisi infection./p> 0.05)/p>